【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：野兔熱(Tul)核酸試劑盒(熒光-PCR法)

【包裝規(guī)格】25T/盒、50T/盒

【檢驗(yàn)原理】本試劑盒采用TaqMan 探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光PCR 技術(shù)，根據(jù) 野兔熱(Tul)基因設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)野兔熱(Tul)的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染病料的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò) 5 次，有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】 ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量PCR 檢測(cè)儀。

【使用方法】

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

核酸提取 推薦采用核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取， 請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；反應(yīng)管數(shù)每滿10 份，多配制1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）將步驟 1 提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取5μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

2.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

2.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；熒光通道選擇：檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM，淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

2.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請(qǐng)參照各儀器使用說(shuō)明書進(jìn)行設(shè)置，以分析 ABI7500 儀器為例） 反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根 據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15、End 值可設(shè)在 5～20，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控 品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊 Analyze 自動(dòng)獲得分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線；

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú)Ct 值，且無(wú)特異性擴(kuò)增曲線；

可疑：樣本檢測(cè)結(jié)果40＜Ct 值≤45，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為40值≤45，且曲線有明顯的增長(zhǎng) 曲線，判定為陽(yáng)性，否則為陰性。

5.3 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 陰性質(zhì)控品：無(wú)特異性擴(kuò)增曲線或無(wú)Ct 值顯示；陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32；以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

【野兔熱(Tul)核酸試劑盒(熒光-PCR法)注意事項(xiàng)】

1.所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完quan混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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