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產品簡介
腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)PCR核酸試劑盒是我司實時熒光探針法試劑盒,種類齊全,精準高效,現貨供應,歡迎廣大新老客戶前來咨詢和選購。
【產品名稱】
商品名稱:腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)PCR核酸試劑盒
【包裝規(guī)格】25T/盒、50T/盒
【檢驗原理】本試劑盒采用TaqMan 探針法實時熒光PCR 技術,根據腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)基因設計特異性引物和熒光探針,用熒光PCR技術對腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)的核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染病料的病原學診斷。
我司的實時熒光探針法試劑盒種類齊全(涵蓋禽病、豬病、馬牛羊病和水產動物病原體檢測),精準高效,多重檢測(一重、雙重、三重),現貨供應歡迎廣大新老客戶前來咨詢和選購。
【試劑組成】
包裝規(guī)格 | 25T/盒 | 50T/盒 |
反應液 | 500μL×1 管 | 500μL×2 管 |
酶液 | 25μL×1 管 | 50μL×1 管 |
陽性質控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
陰性質控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次,有效期 12 個月。
【適用儀器】 ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量PCR 檢測儀。
【腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)PCR核酸試劑盒使用方法】
1.樣品處理(樣本處理區(qū))
核酸提取 推薦采用核酸提取或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進行核酸提取,請按照試劑說明書進行操作。
2.試劑配制(試劑準備區(qū))根據待檢測樣本總數,設所需要的PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;反應管數每滿10 份,多配制1 份),每測試反應體系配制如下表:
試劑 | 反應液 | 酶液 |
用量(樣本數為 N) | 19μL | 1μL |
將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中,20μL/管。
3.加樣(樣本處理區(qū))將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取5μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4.PCR 擴增(核酸擴增區(qū))
2.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;
2.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25μL;熒光通道選擇:檢測通道(Reporter Dye)FAM,淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。
2.3 推薦循環(huán)參數設置:
步驟 | 循環(huán)數 | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 2min | 否 |
2 | 45cycles | 95℃ | 15sec | 否 |
60℃ | 30sec | 是 |
5.結果分析判定
5.1結果分析條件設定(請參照各儀器使用說明書進行設置,以分析 ABI7500 儀器為例) 反應結束后自動保存結果,根據分析后圖像調節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值(用戶可根 據實際情況自行調整,Start 值可設在 3~15、End 值可設在 5~20,使閾值線位于擴增曲線指數期,陰性質控 品的擴增曲線平直或低于閾值線),點擊 Analyze 自動獲得分析結果。
5.2結果判斷
陽性:檢測通道Ct 值≤40,且曲線有明顯的指數增長曲線;
陰性:樣本檢測結果無Ct 值,且無特異性擴增曲線;
可疑:樣本檢測結果40<Ct 值≤45,建議重復檢測,如果檢測通道仍為40值≤45,且曲線有明顯的增長 曲線,判定為陽性,否則為陰性。
5.3 質控標準 陰性質控品:無特異性擴增曲線或無Ct 值顯示;陽性質控品:擴增曲線有明顯指數增長期,且 Ct 值≤32;以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。
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